30.06.20

464

Новий підхід до хвороби Гамборо

Др. Уді Ашаш, Др. Амнон Майкл, Phibro Animal Health Corporation

 

 

Нове захворювання, що виникло в 1960-х роках і було вперше ідентифіковане в містечку Гамборо, штат Делавер, США. Хвороба спостерігалась у бройлерів. Птахи скупчувалися разом, мали скуйовджене пір’я і забруднену клоаку. Типовими ознаками при розтині були ниркові виразки. Значно зростали показники падежу. Пташиний нефроз, як спершу називали цю хворобу, став відомий як хвороба Гамборо і отримав офіційну назву «Інфекційна бурсальна хвороба» (ІБХ), оскільки основним ураженим органом була бурса Фабриціуса (БФ).

Збудник був ідентифікований як вірус, і було виявлено його стійкість до впливу навколишнього середовища і хімічних речовин. Незабаром після цього стало очевидно, що вірус має особливу спорідненість до лімфатичної тканини і руйнує незрілі (IgM +) B-лімфоцити. Вірус був також виявлений в вилочковій залозі, селезінці і мигдалинах сліпої кишки. Як результ такої масивної атаки на лімфоцити, особливо у дуже молодих курчат, була серйозна імуносупресія.

Згодом були розроблені живі атенуйовані вакцини, що дозволило взяти під контроль руйнівні наслідки захворювання.

Гіперімунні племінні стада

Як наслідок, стало очевидно, що племінні стада птиці повинні бути імунізовані, щоб передавати материнські антитіла (МАТ) курчатам. На ринок були випущені інактивовані масляні вакцини, і їх застосовували до початку яйцекладки. Здавалося, що все було добре, і можна було розслабитися. Але так тривало не довго.

На початку 1980-х років в США почали реєструватися варіантні штами ІБХ у бройлерів, що поставило під загрозу ефективність живих вакцин. Варіанти були ізольовані в Джорджії, Арканзасі і Міссісіпі. Були розроблені нові живі атенуйовані варіантні вакцини, які допомогли тримати під контролем захворюваність птиці.

Справжнім шоком для галузі в кінці 1980-х років став дуже небезпечний вірус (vvIBDV), який завдав руйнівної шкоди як молодій, так і дорослій птиці в Голландії, Великобританії та інших країнах. У деяких стадах падіж сягав 80%. Існуючі живі вакцини, які до того відмінно працювали, раптово стали абсолютно неефективними, а виробники птиці знову виявилися безпорадними. Було виявлено, що серотип нових ізолятів вірусу був спорідненим з оригінальним, класичним вірусом ІБХ, але, очевидно, це був набагато більш вірулентний варіант.

Бройлери, які раніше були добре захищені материнським імунітетом, захворіли, оскільки vvIBDV подолав досить високі рівні МАТ, які при цьому перешкоджали активній імунізації існуючими на той час живими вакцинами. Дослідникам і виробникам вакцин  довелось шукати інший тип вакцин. Необхідна була вакцина, яка  містить більш інвазивний живий вірус, що дозволяв би імунізацію на значно вищих, ніж звичайно, рівнях МАТ.

Поява «проміжної» вакцини

Нова вакцина мала бути досить інвазивною, щоб успішно конкурувати з польовим вірусом, але в той же час бути досить безпечною, щоб не пригнічувати імунну систему молодого курчати. Іншими словами, інвазивність і вірулентність мали бути «проміжними». Вже на початку 1990-х років кілька таких вакцин вийшли на ринок і використовувалися на фермах в Європі, Азії та Африці.

Поряд з появою цих нових вакцин з’явилася нова термінологія. Вакцини почали називати «м’якими», «проміжними», «проміжними плюс» або «гарячими». Досить заплутані характеристики використовувалися для опису кожного типу в спробі відрізнити їх одну від одної.

Імуносупресія

Коли імунна система пригнічена або дисфункціонує, всі інші системи в організмі курки можуть вийти з ладу. Багато мікроорганізмів, які є нешкідливі в нормальних умовах, раптово стають дуже шкідливими для ураженої птиці. Очевидно, що в такій ситуації продуктивність курчат з імуносупресією дуже погана, не кажучи вже про підвищений рівень падежу і вартість лікування. Вкрай необхідно уникати імуносупресії у курчат. Однак, імуносупресія може бути результатом багатьох екологічних і управлінських причин. Погані умови інкубації, стреси від спеки або холоду, недоїдання, скупченість, мікотоксини є причинами підвищеного рівня кортикостерону, що викликає імуносупресію. Кишкова паличка та інші інфекції також підвищують рівень кортикостерону. Існують імуносупресивні захворювання, які безпосередньо впливають на імунну систему – лімфолейкоз, хвороба Марека, реовіроз, анемія, інфекційний ларинготрахеїт, ретикулоендотеліоз, а також ІБХ.

У випадку ІБХ безпосереднім показником імуносупресії є зменшення кількості лімфоцитів або їх повна відсутність в фолікулах БФ. Тому оцінка імовірної шкідливої дії вакцини проти хвороби Гамборо проводиться, в тому числі, шляхом гістологічного дослідження зрізів БФ через певні проміжки часу після вакцинації.

Поріг прийнятності

Незабаром після появи vvIBDV регулюючі органи МЕБ вирішили питання про те, яка вакцина буде вважатися безпечною. Типовий звіт правил був встановлений в ЄС (Гвіттет та ін., 1992). «Поріг прийнятності», як його називали, визначав ознаки прийнятної вакцини для проти ІБХ. Така вакцина могла викликати помірне і тимчасове збільшення бурси, спричиняти виразки, які заживають протягом чотирьох тижнів, і не викликати імуносупресії (це перевірялося здатністю організму курчати реагувати на вакцинацію проти хвороби Ньюкасла). Вакцина повинна бути генетично стабільною і не реверсувати до вірулентної форми після декількох пасажів у курей.

Параметри Бурси та імуносупресія

Для спроби оцінити імунний статус курчат після вакцинації проти ІБХ були розроблені різні параметри. Маса БФ, співвідношення БФ до маси тіла (БФ/МТ) та показник ураження бурси були загальними параметрами при оцінці безпечності вакцин проти ІБХ.

Але на розмір і масу БФ впливає не тільки ІБХ. Існує досить багато різних причин і факторів, які можуть призвести до набрякання або атрофії БФ. Серед них – хвороба Марека,  анемія, афлатоксини, стрес через скупченість, екстремальні погодні умови, зміни в раціоні тощо. Отже, розмір БФ не є єдиним показником для ІБХ. (До речі, перша виразка у курки, зараженої ІБХ, являє собою роздуту желатинову БФ. Тільки пізніше БФ атрофується і зменшується).

Розмір або маса БФ не вказує на лімфатичний вміст БФ. B-лімфоцити, що знаходяться в БФ, є такими, що продукують антитіла. У перші дні після вилуплення вони присутні майже виключно тільки в БФ. Таким чином, кількість лімфоцитів в бурсі Фабриціуса є дійсно важливим фактором в оцінці серйозного пошкодження, яке може призвести до імуносупресії.

В 1979 р. Маскетт запропонував оцінку ураження БФ. Оцінка становить від 0 до 4, де 0 – нормальна БФ, а 4 – повне виснаження лімфоцитів з БФ. БФ, яка має оцінку 1 або 2, все ще може продукувати антитіла і реагувати на щеплення. Таким чином, дещо зменшена за розміром або масою БФ до середнього балу ураження +2, ймовірно, буде цілком функціональною. Вплив на БФ сильно залежить від віку птиці. В перші дні після вилуплення БФ уражається дуже погано, але пошкодження імунної системи набагато менш виражено у віці 10 днів і пізніше. До того віку інші зародкові центри стають функціональними і компенсують дефіцит бурси.

Ще більше проблем існує у трактуванні цих параметрів. Серед таких – невелика вибірка (зазвичай 5 птахів) і низька статистична значимість такого розміру вибірки.

Суть в тому, що фізичні параметри бурси недостатньо точні і тому не повинні використовуватися в якості швидкого інструменту для оцінки імунного статусу птиці. Єдиним реальним параметром безпечності є лабораторне дослідження, в якому ми вакцинуємо СПФ-курчат вакциною проти ІБХ, потім вакциною проти НХ, а потім перевіряємо титри антитіл проти НХ і захист від зараження вірулентним штамом НХ.

Рівень антитіл проти ІБХ

Постає питання: наскільки високий рівень МАТ має бути в курчат? В племінних стадах ми намагаємося досягти високого рівня, який триватиме протягом періоду яйцекладки і захистить виводок від ранньої інфекції. Це досягається вакцинацією однією або декількома дозами живої вакцини з подальшою однією або двома ін’єкціями інактивованою масляною вакциною до періоду яйцекладки.

Інша проблема, пов’язана з визначенням антитіл, полягає в використанні різних наборів ELISA. Титр стада по ELISA не обов’язково відображає рівень захисту від зараження через різні антигени, які використовуються виробниками таких наборів.

Материнські антитіла

У стадах бройлерів є подвійна проблема: визначення оптимального часу для вакцинації живою вакциною проти ІБХ, зважаючи на рівень МАТ: як мінімізувати період, коли материнські антитіла вже зникли, а антитіла від вакцини ще не досягли відповідного мінімального рівня. Оптимальний вік для вакцинації стада бройлерів залежить від однорідності МАТ курчат і від імуногенності вакцини (а саме, при якому рівні материнських антитіл вона може імунізувати курчат). Проблеми виникають, коли курчат отримують з кількох різних племінних стад, що призводить до різних рівнів МАТ. Розпад МАТ – це досить стабільний показник. Для визначення оптимального часу вакцинації бройлерів було розроблено кілька формул. Формули Ковенховена і Девентера корисні при розрахунку віку, в якому можна отримати найкращі результати.

Як правильно підібрати рішення проблеми хвороби Гамборо

Є кілька варіантів вирішення проблеми ІБХ. Звичайна практика полягала в тому, щоб вакцинувати молодих курчат-бройлерів один або кілька разів живими вакцинами, щоб подолати проміжок часу між захистом материнських антитіл і формуванням  активного імунітету після вакцинації. Коли у курчат різний рівень МАТ, ця проблема стає набагато серйознішою, викликаючи необхідність у щепленні кілька разів. Інша проблема полягає в тому, що багато великих корпорацій повинні покладатися на правильне застосування вакцин на численних контрактних фермах.

Щоб подолати ці проблеми, вигідно мати загальний контроль в інкубаторії. Курчата, що виходять з інкубатору вже імунізовані проти ІБХ, і це є оптимальним вирішенням всіх перелічених вище проблем.

В галузі птахівництва з’явилося два види вакцин, які забезпечують такий контроль на рівні інкубаторію – векторні вакцини і імунокомплексні вакцини. Векторні вакцини містять вірус-носій, як, наприклад, вакцина проти хвороби Марека з вірусом герпеса, генетично модифікована для доставки сегмента вірусу ІБХ, що вводиться in-ovo на 18-й день інкубації або підшкірно. Імунокомплексні вакцини (IКВ) містять живий вірус проти ІБХ в комбінації з гіперімунною сироваткою з антитілами проти ІБХ,  застосовується in-ovo або в перший день життя.

Нові продукти дали користувачам можливість вакцинації в інкубаторії, проте було встановлено, що настання імунітету у птиці, вакцинованої цими вакцинами, відбувається пізніше, ніж при використанні живих вакцин, що вводяться в потрібний час.

В результаті ці нові продукти не можуть забезпечити повний захист у зонах з високим навантаженням польового вірусу.

У наведеній нижче таблиці описані основні переваги та недоліки сучасних живих вакцин проти хвороби Гамборо:

 Вакцина Жива Імунокомплексна Векторна
Основні

переваги

Ранній захист Застосування в інкубаторі Застосування в інкубаторі
Основні

недоліки

Застосування Запізніле формування

імунітету

Не живий вірус Гамборо, запізніле формування імунітету

 

Компанія Phibro Animal Health Corporation розробила нову концепцію, яка буде мати всі переваги векторних та ІКВ вакцин і забезпечить імунітет, подібно традиційній живій вакцині, що вводиться в правильний час, без явних недоліків.

MB-1:

Вакцинний вірус – це штам MB, адаптований для застосування in-ovo або шляхом ін’єкцій добовим курчатам в інкубаторі. Потрапивши в орагнізм, вакцинний вірус індивідуально адаптується до титру МАТ курчати і буде реплікувати в бурсі тільки тоді, коли ці титри впадуть нижче титрів прориву. Те, що створили співробітники Phibro Animal Health Corporation, є поєднанням здатності MB рано формувати імунітет і широкого спектру захисту зі зручністю застосування в інкубаторі.

Діаграма 1: Порівняння титрів МАТ у комерційних бройлерів, вакцинованих in-ovo вакциною MB-1, з титрами комерційних бройлерів, вакцинованих in-ovo імунокомплексною вакциною (Бразилія, 2017)

Вік (дні)

MB-1 – синя лінія                           Імунокомплексна вакцина – помаранчева лінія

P=<0,05 , t-тест

 

У бройлерів, вакцинованих MB-1, формування антитіл відбувається в 28 днів, а  після імунокомплексної вакцини – в 32 дні, що на 4 дні пізніше, ніж у бройлерів вакцинованих МB-1. Ці дані показують, що реплікація вакцинного штаму MB-1 в бурсі бройлерів була у віці 16-18 днів, в той час як вірус імунокомплексної вакцини  почав реплікацію у віці 20-22 днів.

Дані аналогічних польових випробувань, проведених в Азії, Африці і Латинській Америці, показують ті ж результати без будь-яких негативних побічних впливів на продуктивність вакцинованих птахів.

Важливість раннього настання захисту була добре описана Гомесом та ін. (AAAP Indianapolis 2017). Ми виявили, що після переходу з векторної на нову живу вакцину МВ-1, кількість стад позитивних до субклінічних або вірулентних польових штамів вірусу ІБХ згідно ПЛР (RT) знизилася на 89%, і запалень  з’єднувальної  тканини стало менше на 42%. Ці та інші цифри демонструють, що при високому навантаженні ІБХ вакцинація живою вакциною зі штамом MB знизила вплив польових штамів ІБХ і забезпечила кращі зоотехнічні результати і індекс відбракування, ніж векторні вакцини або тільки імунокомплексні вакцини.

Новий підхід до хвороби Гамборо